一、細胞株說明書

        細胞株或細胞系在引進時，需要查閱正規的培養物保藏中心的有關細胞株系的編號或產品號。如惡性黑色素瘤A375細胞株，在ATCC(TheAmericanTypeCultureCollection，美國典型培養物保藏中心）的保藏號為CRL-1619。

        從各地保藏中心購買引進的細胞株都應該配套有對應的細胞株說明書，內容包括細胞株的寄存者（MAX初建立株系的負責人）、培養時所用培養基和血清的要求、是否貼壁生長或懸浮生長、建株來源組織細胞種類、繁殖條件（培養條件：培養基種類、血清添加量、其他添加物、CO2濃度、培養溫度等）、傳代要求（傳代時機、傳代比例等）、凍存條件（凍存液組方、凍存溫度）等。在引進前要充分了解該細胞株的說明書內容，尤其要熟知細胞株的繁殖條件、傳代要求和凍存條件等事項。

        二、細胞增殖

        典型培養條件下的動物細胞、人類細胞，會正常進行細胞分裂，日漸增加細胞數量。可增殖細胞是細胞具有良好活性的特征。

        增殖也是細胞固有的屬性之一，不同細胞株的增殖周期不同，多數培養細胞的增殖周期或細胞周期是20-24h。

        哺乳動物細胞的分裂是二分裂，如果是20-24h分裂一次，那么細胞生長克隆的細胞數與培養天數（n)的關系可以表達為2n-1，如此，第1、2、3、4天的細胞個數分別為1、2、4、8、16。對于靜態懸浮細胞培養，依據此關系，通過鏡檢獨立的細胞克隆，計數平均每個獨立細胞克隆的細胞個數，則非常容易知道是哪天進行的接種培養。

        三、細胞生長曲線

        （一）概述

        在營養物質一定的體外培養體系中，無菌培養條件下，動物細胞的生長狀況和生長速度與接入的細胞密度有關系。描述細胞生長的連續變化中細胞密度與培養時間的關系，往往用細胞生長曲線表示，包括遲緩期、對數生長期、穩定期和衰退期。正確的生長曲線描述，依賴正常的培養條件和無菌操作，并且需要熟練的細胞計數操作。細胞生長曲線是以細胞密度為縱坐標、累計培養時間為橫坐標作圖描繪的折線圖，也可以直接以細胞密度作縱坐標、累計培養時間為橫坐標在半對數表上作圖描繪的折線圖。若每隔24h測定細胞密度，可用天（d)作累計培養時間單位，若隔12h或更短時間測定細胞密度，建議使用小時（h)作累計培養時間單位。

        作為細胞生長曲線觀察用的培養物，在后續培養過程中，不得改變培養體系即培養液的體積，要確保培養條件的穩定。需要換液時采用定量換液方法操作，使用同樣體積的新鮮培養液替代廢棄培養液，不干擾細胞團，不取出細胞。培養條件包括溫度、CO2濃度、趨飽和濕度，一般要求二氧化碳培養箱37℃、5%CO2濃度、相對濕度90％以上的條件下進行哺乳動物細胞培養。

       （二）生長曲線對于哺乳動物細胞培養的意義

        典型的生長曲線包括遲緩期、對數生長期、穩定期和衰退期這4個時期。生長曲線也是細胞株具有的*屬性，不同細胞株的生長曲線圖形不*一致。

        日常培養的細胞株用于某種目的前，建議預先培養以便觀察其細胞生長曲線，了解該細胞株的合理接種密度。

        (1)當接種細胞密度足夠高時，將不出現典型的遲緩期或遲緩期很短，并且到達衰退期的累計培養時間MAX短。進行細胞藥理或細胞毒理試驗時，預培養的細胞接種密度往往控制在1×105-2×105/ml范圍，以便在加載供試藥物時，所培養的細胞處于對數生長期并已形成單層或接近單層。

        (2)當接種細胞密度合理時，會出現典型的遲緩期，并且到達衰退期的累計培養時間比較短。正因為如此，進行傳代培養、原代培養、擴大培養時，一般細胞培養時都要控制接種密度在2×104-5×105/ml范圍。

        (3)當接種細胞密度太低時，會出現很長的遲緩期，很難觀察到對數生長期、穩定期和衰退期，要觀察到衰退期的累計培養時間非常長。在依賴哺乳動物細胞培養進行生物制品生產的過程中，尤其需要避免此種細胞密度下的接種培養，以免造成不必要的經濟損失和時間浪費。